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定向克隆の例文

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  • 应用逆转录-聚合酶链式反应( rt - pcr )技术克隆得到编码草鱼生长激素( cgh )的基因cdna ,并定向克隆到puc18载体上。
  • Pcr产物经纯化、酶切后,按正确的阅读框架定向克隆到表达性载体pgex - 6p - 1中谷胱甘肽转移酶( gst )基因的下游。
  • 利用vp7基因和质粒pbi121上相同的单克隆位点,将vp7基因定向克隆到植物表达载体pbi121上,构建了pbi121vp7表达载体。
  • 通过从重组质粒pbi121上切下s基因(连同35s启动子)片段,将该片段定向克隆到pcambia1305 . 1质粒的多克隆位点hind 、 bamh之间,构建了一种植物表达载体。
  • 用pcr方法扩增番红花八氢番茄红素脱氢酶( pds )编码区序列,定向克隆到表达载体pet一艺1a ( + )上,获得重组质粒pet一21a ( + ) / cspds 。
  • 实验通过分子重组技术,采用定向克隆法将绿色荧光蛋白基因亚克隆到puc118a上鲤鱼-肌动蛋白基因启动子下游,构建成能在真核生物体内表达的表达载体pagfp ,经双酶酶切法序列鉴定后,回收带启动子和目的基因片段。
  • 同时扩增p22编码基因orf的全长561bp片段,经pst 、 xba双酶切后,定向克隆于质粒pbudce4 . 1 ,构建真核重组重组表达质粒pbudce4 . 1 / p22 ,通过脂质体介导转染入小鼠巨噬细胞raw264 . 7 ,以rt - pcr方法鉴定目的基因在巨噬细胞中的表达。
  • 菌株的亚克隆基因组片段中,分离出phaa 、 phab和phac三个基因片段,定向克隆至原核表达载体pbv220上,构建了三个原核生物表达载体pbv - a 、 pbv - b和pbv - c ,通过对表达载体诱导表达,表达蛋白产物的sds - page分析、生物活性与功能分析,确定了基因phaa 、 phab和phac的生物学功能。
  • 为了提高外源基因的表达量,我们根据毕赤氏酵母偏爱密码子人工合成了编码fl胞外区156个氨基酸的cdna序列,目的序列被定向克隆到酵母分泌型表达载体ppic9k质粒上,构建ppic9k - fl表达质粒。
  • 本实验采用pcr方法从番茄花cdna文库中克隆到叶绿体shsp基因,经测序证实与genbank中已发表的序列在编码区相差2个碱基,其中一个碱基导致1个氨基酸的改变。将叶绿体shsp基因定向克隆于带有组成性表达启动子camv35s的植物表达载体prok中,冻融法转化农杆菌lba4404 ,利用叶圆盘法对番茄进行ti质粒介导的遗传转化。
  • 结果表明:运用msha法检测1型菌毛的检出率为80 ( 36 45 ) , pcr法的检出率为95 . 5 ( 43 45 ) , pcr方法用于1型菌毛的检测比msha更加敏感、快速、特异性强;选择5株优势血清型鸡源致病性大肠杆菌代表株( o _ ( 89 ) , o _ ( 119 ) , o _ ( 141 ) , o _ ( 127 ) )的1型菌毛pila基因的pcr扩增片段经纯化后,分别定向克隆到puc18质粒的多克隆位点,构建了含有目的基因片段的克隆质粒,并转化到dh5株大肠杆菌载体菌中,筛选获得阳性克隆菌株。
  • 将phaa 、 phab和phac片段双酶切后,定向克隆至原核表达载体pbv220 ,构建了三个原核表达载体pbv - a 、 pbv - b和pbv - c ;经酶切分析表明,所克隆的三个基因phaa 、 phab和phac置于表达载体的正确阅读框架下。
  • 分取诱导培养液中的菌体,用异硫氰酸胍法提取总rna ,总rna再经无rna酶的dna酶处理后用于rt ? pcr 。在pcr扩增目的基因时,通过优选扩增体系,使镁离子浓度为1 . 25mm时rt ? pcr可顺利地获得目的基因,并能定向克隆到载体pgem ? 3z ( amp ~ r )中。用克隆载体转化宿主大肠杆菌jm109 ,通过筛选获取阳性克隆子,对阳性克隆子进行酶切与pcr鉴定,并对载体中插入的目的基因进行测序。
  • 为了探索ibv可食性疫苗的可行性,我们进行了转基因马铃薯表达ibv免疫原基因及其表达产物免疫原性的研究,取得以下结果: 1根据周继勇等报道的ibv - zj971毒株s1基因核苷酸序列和pbi121植物表达载体的多克隆位点,设计并合成引物,以含s1pbs质粒为模板扩增s1基因,将扩增片段定向克隆到pbi121质粒的35s启动子下游。